分子克隆实验小鼠β-actin基因片段T-A克隆及其鉴定201612T-A克隆重组:是简单的PCR产物直接重组方法原理:TaqDNA聚合酶(具有有末端连接酶活性)在扩增目的基因片段时,可不依赖其模板,可在PCR产物两端(3’)自动加上碱基(尤其优先加上A)。为此,在T4DNA连接酶催化下,实现质粒载体(载体酶切切口具有游离T)和PCR产物的直接连接,实现DNA片段重组该法已广泛应用,如商品化载体如pGEM-T实验原理酶切之后末端再添加T,就成可T...
分子克隆及蛋白表达常见问题和对策一、重要意义与应用(一)重要意义分子克隆技术起步于上世纪70年代1、开辟了分子生物学研究的新领域;2、打开了人类了解、识别、分离和改造基因,创造新物种的大门;3、对工业、农牧和医药业产生深远影响;4、将为解决世界面临的能源、食品和环保三大危机开拓新的出路。一、重要意义与应用分子克隆技术基因工程细胞工程酶工程发酵工程紧密联系、综合利用(二)在工业生产中的应用一、重要意义...
分子克隆(一)基本概念:•克隆(Clone)指的是通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。•分子克隆(MolecularCloning)是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组,将重组分子导入到合适的受体细胞中,使其在细胞中扩增和繁殖,以获得DNA分子大量复制,并使受体细胞获得新得遗传特征的过程。载体DNA(vector)目的DNA(targetfragment...